PRACTICA NO.4 "METODO POR SEDIMENTACION DE WILLIS"

 PRACTICA IV

Centro de Bachillerato Tecnológico industrial y de servicios no. 199

Nombre del alumno: Sarai Pérez Tovar

Dr. Vicente Martínez Fragoss.

Grado: 3º   Grupo: DM

Laboratorista Clínico

Desarrollar técnicas parasitólogicas

Equipo no.2

 Practica: “Método de concentración-Flotación de Willis”

Método de concentración por flotación de Willis

Objetivo: Realizar métodos de concentración en este caso el de Willis que nos ayuda a identificar huevecillos de parásitos ligeros.

Fundamento: Este método esta recomendado especialmente para la investigación de protozoarios y helmintos. Consiste en preparar la materia fecal con solución saturada de cloruro de sodio.

Los huevos y quistes de peso específico menor que la solución saturada de cloruro de sodio tienden a subir y adherirse a un cubreobjetos colocado en contacto con la superficie del líquido.

Material:                             Material biológico:             Reactivos:

*1 Vaso de precipitados      *Muestra de heces               *Solución saturada de NaCl

*1 Embudo                                                                            *Solución de yodo lugol

*1 Gasa

*1 Tubo de ensaye

*1 Porta objetos

*1Cubre objetos

Procedimiento:

1.-Tomar aproximadamente 1gr de heces fecales con un abate lenguas.

2.-Colocar la muestra en un vaso de precipitados y mezclar con 10ml de solución saturada de cloruro de sodio.

3.-En un tubo de ensaye filtre la mezcla con una gasa llenando completamente el tubo.

4.-Coloque un cubre objetos sobre el tubo, de manera que el liquido haga contacto con el cubreobjetos.

5.-Esperar de 5 a 10 minutos.

6.-Los quistes o huevos flotaran y quedaran adheridos a la cara del cubre objetos que esta en contacto con la mezcla.

7.-Colocar una gota de yodo lugol sobre un porta objetos, retirar el cubreobjetos con cuidado para evitar perdida del material y ponerlo sobre el porta objetos.

8.-Examinar la muestra al microscopio con el objetivo de 40X, buscando quistes o huevecillos de parásitos.

9.-Reportar sus resultados con imágenes.

Conclusiones: Este método es de alta sensibilidad en el diagnostico de huevos livianos de helmintos: A. duodenale, N. americanus, A.lumbricoides, H. nana. No indicado en la búsqueda d huevos pesados ni de larvas.

PRACTICA NO.3 "METODO DE CONCENTRACION POR SEDIMENTACION DE RICHIE"

 PRACTICA III

Centro de Bachillerato Tecnológico industrial y de servicios no. 199

Nombre del alumno: Sarai Pérez Tovar

Dr. Vicente Martínez Fragoss.

Grado: 3º   Grupo: DM

Laboratorista Clínico

Desarrollar técnicas parasitólogicas

Equipo no.2

 Practica: “Método de concentración por sedimentación Ritchie”

Método de concentración por sedimentación Richie

Objetivo: Realizar un método de sedimentación con gran sensibilidad para detectar infecciones leves.

Fundamento: Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.

Unas ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

Material:                                    Material biológico:                Sustancias:

*Centrifuga                                 *Muestra de heces            *Soluc. Salina isotónica

*Tubos de ensaye cónicos de 15ml                                        *Soluc. De formaldehído al 5%

*Gasa cortada en cuadros                                                                *Éter

*Embudos de polietileno

*Vasos de precipitado de 50ml

*Aplicadores de madera

*Pipeta pasteur con bulbo

*Porta objetos

*Cubre objetos

*Microscopio

Método:

1.-Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1gr. De la materia fecal en el vaso de precipitados, se añade 10ml de solución salina y se homogeniza.

2.-Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recogiendo el filtrado en el tubo cónico.

3.-Se centrifuga la suspensión durante 2min. A 2000 rpm.

4.-Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con solución salina, centrifugando, decantando, y resuspendiendo 2 veces mas.

5.-Al ultimo sedimento se agrega 5ml de solución de formaldehído al 5% se mezcla y se deja reposar durante 10min.

6.-Se añade después 5ml de éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan enérgicamente durante 30 segundos.

7.-Se centrifuga durante 2 minutos a 2000 rpm.

8.-Después de centrifugar se observan 4 capas:

-Éter en la superficial

-Un tapón de restos fecales

-Formaldehído

-Sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.

9.-Se decanta el sobrenadante.

10.-Se introduce la pipeta pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en el porta objetos.

11.-Se le añade una gota de lugol y con uno de los ángulos del cubreobjetos, se homogeniza, cubriendo con el mismo.

12.-Se observa la preparación en el microscopio con los objetivos de 10X y 40X.

Conclusión:

En la muestra que utilizamos se observaron grasas y quistes, así de esta manera aprendimos a identificar los distintos tipos de parásitos por su morfología y reforzamos nuestra capacidad para enfocar en el microscopio.

PRACTICA NO.2 "METODO POR FLOTACION DE FAUST"

 PRACTICA I

Centro de Bachillerato Tecnológico industrial y de servicios no. 199

Nombre del alumno: Sarai Pérez Tovar

Dr. Vicente Martínez Fragoss.

Grado: 3º   Grupo: DM

Laboratorista Clínico

Desarrollar técnicas parasitólogicas

Equipo no.2

 Practica: “Método de concentración-Flotación de Faust”

Método de concentración-Flotación de Faust

Fundamento: Este método se utiliza con solución de Zn, cuya densidad especifica es de 1.180(33%), que conforma un medio de densidad mas alta que la de los huevos: Necator 1.055, Tricocéfalo 1.150, Áscaris fértil 1.110 y facilita que los huevos livianos de estos helmintos, con menor peso especifico que la solución, se concentren y floten.

Material:                    Material biológico:               Reactivos:

*Porta objetos            *Muestras de heces               *Sol. Acuosa de sulfato de Zn.

*Cubre objetos                                                         *Yodo lugol

*Gasas

*Embudo

*Tubos de ensayo

*Vaso de precipitados

*Agitador

*Microscopio

*Centrifuga

Técnica:

1.-Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una superficie en 10 partes de agua destilada.

2.-Filtrar la suspensión a través de una gasa doblada en cuatro sobre un tubo  de centrifuga, ayudándose con un embudo pequeño.

3.-Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1 minuto.

4.-Decantar el líquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Resuspender el sedimento.

5.-Repetir el procedimiento 2 veces hasta que el liquido sobrenadante este listo.

6.-Decantar nuevamente el liquido sobrenadante reemplazándolo por igual cantidad de solución de sulfato de Zn al 33%.mezclar bien la solución con el sedimento.

7.-Centrifugar durante 1 minuto a 1500 rpm.

8.-Tomar de 3-4 gotas de las partículas, que flotan en la superficie del liquido. Colocarlos en un porta objetos y mezclarla con 1-2 gotas de lugol, colocar cubre objetos.

9.-Examinar al microscopio y reporte sus resultaos.

 Resultados:

1.-Observamos grasa

2.-Residuos vegetales

3.-Fibras

Conclusión: En los métodos de concentración por flotación para examen coproparasitoscópico, se toman en cuenta el peso específico de las formas parasitarias (quistes, huevos, larvas) para hacerlos flotar. Con este fin se utilizan soluciones que tengan mayor densidad que los elementos buscados, las sustancias que más se utilizan en la actualidad son el Sulfato de Zinc, con el se prepara una solución con densidad de 1.180 y la salmuera (solución saturada con cloruro de sodio).

PRACTICA NO.1 "COPROPARASITOSCOPICO DIRECTO"

PRACTICA I

Centro de Bachillerato Tecnológico industrial y de servicios no. 199

Nombre del alumno: Sarai Pérez Tovar

Dr. Vicente Martínez Fragoss.

Grado: 3º   Grupo: DM

Laboratorista Clínico

Desarrollar técnicas parasitólogicas

Equipo no.2

Práctica: “Copropasitoscópico directo”

Coproparasitoscópico Directo

Fundamento: Este método solo sirve para evidenciar la presencia de un determinado parasito, y se trata de un método cualitativo que no permite conocer el numero de formas larvarias que hay por cada gramo de heces y por lo tanto la carga parasitaria.

FROTIS FRESCO: es un método rápido pero poco seguro. Tiene posibilidad de falsos negativos, por lo que es necesario repetir. Permite observar la motilidad de los microorganismos: amibas y otro flagelados. Detecta quistes y huevos de helmintos. Precisa una concentración.

Material:                 Material biológico:             Sustancias:

*Porta objetos          *Heces fecales frescas        *Sol. Fisiológica al 0.9%

*Cubre objetos                                                     *Sol. De yodo

*Pipeta pasteur

*Vaso de precipitado

*Microscopio

Procedimiento:

1.-Sobre un porta objetos bien limpio se coloca una pequeña porción de material fecal.

2.-Se le agrega una gota de Sol. Fisiológica.

3.-se coloca el cubre objetos.

4.-Se observa, primero sin teñir.

5.-En otro porta objetos limpio se repite el mismo procedimiento pero ahora se tiñen con la tinción de yodo.

Es importante que los frotis no sean densos, sino transparentes. Y que se haga la observación con ambas muestras.

Tras la observación de trofozoitos se utiliza la tinción de yodo que tiñe quistes  y descansa sus detalles. (Los trofozoitos mueren y resultan identificables).

L observación se hace siempre con el objetivo seco débil (10x) y con poca luz; al encontrarse estructuras sospechosas, se observa con el objetivo seco fuerte (40x).

Conclusión: El examen coproparasitoscópico es uno de los estudios de laboratorio que se pueden hacer para analizar las heces fecales, en particular este estudio se utiliza para identificar anormalidades correspondientes a infecciones parasitarias.
El tipo de muestra recogida dependerá de la especie y forma del parásito sospechado. El conocimiento del ciclo vital del parásito ayuda a determinar el tipo, cantidad y frecuencia de los especimenes necesarios para el diagnóstico.

PRACTICA NO.1 "COPROPASITOSCOPICO DIRECTO"